猪肺炎支原体P65基因原核表达及免疫原性分析

doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2014.02.014

畜牧兽医学报 ›› 2014, Vol. 45 ›› Issue (2): 262-267.doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2014.02.014

猪肺炎支原体P65基因原核表达及免疫原性分析

刘茂军^1,2，张悦^1,2，杜改梅¹，白昀¹，王海燕¹，姜平²，邵国青^1*

（1.江苏省农业科学院兽医研究所，农业部兽用生物制品工程技术重点实验室，国家兽用生物制品工程技术研究中心，南京 210014；2.南京农业大学动物医学院，南京 210095）

收稿日期:2013-08-27 出版日期:2014-02-23 发布日期:2014-02-23
通讯作者: 邵国青，Tel：025-84391973，E-mail:gqshaonj@163.com
作者简介:刘茂军（1977-），男，博士生，副研究员，山西阳曲人，主要从事动物传染病防控研究，Tel:025-84391689，E-mail:maojunliu@163.com
基金资助:
江苏省农业科技自主创新资金［CX（13）3066］

Prokaryotic Expression and Immunogenicity Identification of P65 from Mycoplasma hyopneumoniae

LIU Mao-jun^1,2，ZHANG Yue^1,2，DU Gai-mei¹，BAI Yun¹，WANG Hai-yan¹，JIANG Ping²，SHAO Guo-qing^1*

(1.Key Laboratory of Veterinary Biological Engineering and Technology of Ministry of Agriculture，National Center for Engineering Research of Veterinary Bioproducts，Institute of Veterinary Medicine，Jiangsu Academy of Agricultural Sciences，Nanjing 210014，China; 2.College of Veterinary Medicine，Nanjing Agricultural University，Nanjing 210095，China)

Received:2013-08-27 Online:2014-02-23 Published:2014-02-23

摘要/Abstract

摘要：

P65蛋白是猪肺炎支原体的主要免疫优势蛋白，与其他支原体无交叉反应，常作为猪肺炎支原体检测的靶蛋白。本研究通过基因合成获得P65基因中含有3个稀有密码子的前922 bp，利用PCR从Mhp168株扩增获得P65基因后段，然后通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)将前后段连接后，克隆入pET-32a(+)中，获得重组质粒pET-32a(+)/mhp P65，经IPTG诱导获得87 ku的重组融合蛋白，Western blot分析表明其与Mhp血清呈强阳性反应。将该重组蛋白免疫小鼠获得了高滴度的特异性抗体，表明该蛋白具有良好的免疫原性。本研究成功表达了可溶性的Mhp P65融合蛋白，其具有较好的免疫原性，这为猪肺炎支原体P65蛋白的功能研究以及诊断学方法的建立和亚单位疫苗的研制提供了帮助。

Abstract:

Protein P65，the immunodominance protein of Mycoplasma hyopneumoniae (Mhp)，and shows no cross reaction with other Mycoplasmas，is usually used as the target protein or gene for Mhp detection.In this study，the front 922 bp fragment containing three rare codons in P65 gene was obtained by gene synthesis，and the other fragment of P65 gene was amplified by PCR from Mhp 168 strain，then the mutated P65 gene was obtained through the Splicing by overhang extension (SOE-PCR) with the surplus segment connection，finally the recombinant plasmid pET-32a(+)/P65 was constructed by inserting the mutated P65 gene into expression vector pET-32a(+).Under IPTG induction，E.coli BL21(DE3)/pET-32a(+)/P65 expressed the recombinant P65 protein with 87 kD.The result of Western blot analysis showed that the recombinant protein has satisfactory immunoreactivity.High level of antibody was obtained in BALB/c mice after inoculating the recombinant P65 protein，which indicated the recombinant P65 protein has a good immunogenicity.We had successfully obtained the recombinant P65 protein of Mhp by expressing in the E.coli，it provide the support for Mhp detection and subunit vaccine，and also offers the help for the further study of the pathogenic mechanism of this disease.

中图分类号:

S852.62

刘茂军，张悦，杜改梅，白昀，王海燕，姜平，邵国青. 猪肺炎支原体P65基因原核表达及免疫原性分析[J]. 畜牧兽医学报, 2014, 45(2): 262-267.

LIU Mao-jun，ZHANG Yue，DU Gai-mei，BAI Yun，WANG Hai-yan，JIANG Ping，SHAO Guo-qing. Prokaryotic Expression and Immunogenicity Identification of P65 from Mycoplasma hyopneumoniae[J]. ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA, 2014, 45(2): 262-267.

0
/ / 推荐

导出引用管理器 EndNote|Reference Manager|ProCite|BibTeX|RefWorks

链接本文: https://www.xmsyxb.com/CN/10.11843/j.issn.0366-6964.2014.02.014

https://www.xmsyxb.com/CN/Y2014/V45/I2/262

参考文献

［1］吴移谋，叶元康.支原体学［M］.2 版.北京：人民卫生出版社，2008：203-208.
［2］FUTO S，SETO Y，MITSUSE S，et al.Molecular cloning of a 46-kilodalton surface antigen (P46) gene from Mycoplasma hyopneumoniae：direct evidence of CGG codon usage for arginine ［J］. J Bacteriol，1995,177(7)：1915-1917.
［3］SCHMIDT J A，BROWNING G F，MARKHAM P F，et al.Mycoplasma hyopneumoniae p65 surface lipoprotein is a lipolytic enzyme with a preference for shorter-chain fatty acids ［J］.J Bacteriol，2004，186(17):5790-5798.
［4］UPTON C，BUCKLEY J T.A new family of lipolytic enzymes ［J］.Trends Biochem Sci，1995，20(5):178-179.
［5］CHEIKH SAAD BOUH K，SHARECK F，DEA S.Monoclonal antibodies to Escherichia coli-expressed P46 and P65 membranous proteins for specific immunodetection of Mycoplasma hyopneumoniae in lungs of infected pigs ［J］.Clin Diagn Lab Immunol，2003，10(3):459-468.
［6］刘茂军，靳岷，杜改梅，等.检测猪肺炎支原体抗体间接ELISA方法的建立［J］.江苏农业学报，2007，23(5)：437-441.
［7］杜改梅，刘茂军，韦艳娜，等.猪肺炎支原体不同蛋白抗原检测疫苗诱导IgG产生规律的研究［J］.畜牧兽医学报，2013,44(6):925-930.
［8］华利忠，邵国青，周勇岐.以疫苗免疫为核心的猪气喘病控制与净化技术［J］.中国兽药杂志，2012，46(7):50-53.
［9］MAES D，SEGALES J，MEYNS T，et al.Control of Mycoplasma hyopneumoniae infections in pigs ［J］.Vet Microbiol，2008，126(4)：297-309.
［10］ARMSTRONG C H，FREEMAN M J，SANDS-FREEMAN L.Crossreactions between Mycoplasma hyopneumoniae and Mycoplasma flocculare：practical implications for the serodiagnosis of mycoplasmal pneumonia of swine ［J］.Isr J Med Sci，1987，23(6):654-656.
［11］张悦，刘茂军，邵国青.猪肺炎支原体主要抗原蛋白的研究进展［J］.中国农学通报，2013，29(2):16-22.
［12］KIM M F，HEIDARI M B，STULL S J，et al.Identification and mapping of an immunogenic region of Mycoplasma hyopneumoniae P65 surface lipoprotein expressed in Escherichia coli from a cloned genomic fragment ［J］.Infect Immun，1990，58（8）:2637-2643.
［13］UPTON C，BUCKLEY J T.A new family of lipolytic enzymes? ［J］.Trends Biochem Sci，1995，20(5)：178-179.
［14］王红敏，田芳，陈华民，等.环鸟苷二磷酸代谢相关基因PXO03877的原核表达［J］.生物技术通报，2011(12):162-165.
［15］谢琳，巫国辉，李小林，等.构建重组人pET-32a-瘦素高效的表达载体［J］.中国组织工程研究，2012，16(37)：6926-6930.

[1]	谢青云, 邢蕙萱, 于岩飞, 袁厅, 熊祺琰, 熊富强, 冯志新. 猪肺炎支原体解螺旋酶RuvA的原核表达、多克隆抗体制备及活性鉴定[J]. 畜牧兽医学报, 2024, 55(1): 271-281.
[2]	陈启伟, 权衡, 陈胜利, 刘东慧, 于永峰, 李彩玉, 宫晓炜, 储岳峰. 牛支原体能量耦合因子转运蛋白S组件MbBioY摄取外源生物素的功能分析[J]. 畜牧兽医学报, 2024, 55(1): 282-289.
[3]	陈玥彤, 刘晓涵, 王芷洋, 赵宇馨, 周铁忠, 胡增金, 朱悦, 王少辉, 田明星, 丁思羽, 祁晶晶, 于圣青. 广东规模化鸡场死鸡胚中鸡毒支原体的分离鉴定、致病性及药物敏感性[J]. 畜牧兽医学报, 2024, 55(1): 290-299.
[4]	钟乐苗, 刘秉珲, 吴春琳, 吴异健. 基于鸡毒支原体黏附素蛋白的表位疫苗制备及免疫效果评价[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(12): 5171-5183.
[5]	武琪, 张玉娟, 刘桐, 辛九庆, 徐青元. 牛支原体黏附素及黏附素结合蛋白研究进展[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(8): 3206-3216.
[6]	荆婷婷, 尹号, 黄蓉, 兰仕梅, 李章程, 尤留超, 郝华芳, 付磊, 储岳峰. 牛支原体0580基因C端截短体的原核表达及生物学功能初步分析[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(7): 2991-3001.
[7]	陈杨, 孟林春, 郭梦娇, 张成成, 薄宗义, 楚电峰, 曹永忠, 吴艳涛, 张小荣. 检测鸡毒支原体抗体的间接ELISA方法和HI试验方法的建立及初步应用[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(5): 2062-2072.
[8]	吴春琳, 钟乐苗, 赵妍, 李文迹, 黄晓紫, 吴异健. 鸡毒支原体MG-HY株感染鸡气管的转录组学分析[J]. 畜牧兽医学报, 2022, 53(8): 2652-2662.
[9]	许李锋, 贾晨宇, 陈福再, 方梦园, 刘孝丹, 陈吉龙, 李训良. 1株鸡滑液囊支原体的分离鉴定与全基因组分析[J]. 畜牧兽医学报, 2022, 53(8): 2663-2676.
[10]	曾金红, 徐青元, 沙玮萍, 吴爽, 李媛, 辛九庆, 王秀梅. 抗丝状支原体丝状亚种单克隆抗体的制备及初步应用[J]. 畜牧兽医学报, 2022, 53(7): 2290-2299.
[11]	尹德晶, 吴燕, 岳筠, 杨鹏, 陈静, 王慧, 张双翔, 王开功, 程振涛. 丝状支原体山羊亚种LppA蛋白N末端基因真核表达载体构建及小鼠免疫效果分析[J]. 畜牧兽医学报, 2022, 53(3): 847-856.
[12]	刘丽佳, 王誉, 张焕容, 王嘉博. 7株鸡滑液囊支原体四川分离株全基因组分析[J]. 畜牧兽医学报, 2022, 53(2): 505-519.
[13]	岳亚辉, 邢小勇, 武小椿, 温峰琴, 张宏燕, 龙翠琴, 张立, 马海云, 包世俊. 滑液支原体WVU1853株热不稳定延伸因子的表达及黏附特性分析[J]. 畜牧兽医学报, 2022, 53(2): 520-528.
[14]	王佳, 华利忠, 刘蓓蓓, 张磊, 袁厅, 甘源, 韦艳娜, 邵国青, 冯志新, 熊祺琰. 1株猪鼻支原体的分离鉴定及致病性[J]. 畜牧兽医学报, 2021, 52(11): 3185-3193.
[15]	陈胜利, 郝华芳, 季文恒, 储岳峰. 动物支原体相关蛋白的免疫原性研究进展[J]. 畜牧兽医学报, 2021, 52(5): 1230-1237.

猪肺炎支原体P65基因原核表达及免疫原性分析

Prokaryotic Expression and Immunogenicity Identification of P65 from Mycoplasma hyopneumoniae

RichHTML

PDF

可视化

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

参考文献

相关文章 15

编辑推荐

Metrics

本文评价